Dos razones por las que los usuarios de HPLC prep adoran la cromatografía analítica
Vea por qué la cromatografía analítica es beneficiosa y cómo escalar para preparar HPLC en el último artículo del Blog de Bart.
Las purificaciones a gran escala pueden resultar costosas en términos de tiempo, recursos y posibles complicaciones. Es por eso que se recomienda encontrar las condiciones de separación ideales, como la selección de fases estacionarias y móviles, con un experimento de prueba. Para aquellos interesados en realizar HPLC preparatoria, una herramienta perfecta para seleccionar los parámetros de purificación en una escala más pequeña es la cromatografía analítica. En este artículo, mostramos por qué esta técnica es ventajosa y cómo escalar de la cromatografía analítica a la HPLC de preparación.
Los “proyectos piloto” y los “experimentos piloto” son muy comunes en el laboratorio. Este tipo de experimentos proporcionan una excelente manera de probar una hipótesis de forma rápida y económica antes de ampliarla a proyectos más grandes.
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Si usted planea realizar purificaciones a gran escala con HPLC preparativa, su "proyecto piloto" es la cromatografía analítica.
La cromatografía analítica puede ayudar con la selección de fases móviles y estacionarias, al tiempo que ahorra tiempo, costos y reduce las complicaciones durante las separaciones a gran escala. Esta es una buena razón para amar esta técnica.
Sí, la HPLC analítica requiere un equipo totalmente automatizado y el método puede resultar caro. Pero a diferencia de la TLC, la cromatografía analítica se puede realizar con gradientes, lo que puede resultar muy beneficioso para el usuario. Una fase C18 (fase inversa) puede ayudar a mejorar la rentabilidad del proceso. Esto se debe a que la fase C18 se puede reutilizar después del lavado con disolventes orgánicos para eliminar los contaminantes retenidos firmemente. Por el contrario, la sílice no adherida no se puede reutilizar después del lavado.
Cuando configure su proceso de cromatografía analítica, debe elegir las concentraciones de muestra y las velocidades de flujo según las recomendaciones del fabricante. A menudo, se utilizan cantidades de muestra entre 1 y 10 mg y velocidades de flujo entre 0,1 y 10 ml / min.
El objetivo de la cromatografía analítica es separar la línea base del compuesto objetivo de las impurezas en una cantidad mínima de tiempo y con una carga máxima.
Para la selección con una columna analítica, seleccione su fase móvil en función de los consejos de mi publicación de blog anterior sobre fases móviles y su fase estacionaria con consejos de una publicación de blog anterior sobre este tema. Para las fases estacionarias de fase inversa, los disolventes comunes incluyen agua mezclada con metanol, etanol o acetonitrilo.
Una vez que esté satisfecho con sus resultados, puede considerar la posibilidad de ampliar la escala para preparar HPLC . La segunda razón para amar la cromatografía analítica es que es posible escalar a purificaciones a gran escala con la ayuda de algunas fórmulas.
El enfoque más sencillo es mantener el tamaño de partícula de la sílice y las longitudes de la columna analítica iguales a las de la columna de HPLC de preparación. Si logra esto, puede usar las siguientes fórmulas para determinar la carga (volumen o concentración), la tasa de flujo y el diámetro:
LoadingA = LoadingB x (DiamaterA / DiamaterB) 2 x (LongitudA / LongitudB)
CaudalA = CaudalB x (DiamaterA / DiameterB) 2
Donde a = columna de HPLC preparativa
b = columna de HPLC analítica
Para finalizar su método, puede utilizar el mismo perfil de gradiente (proporción de disolventes y tiempo) para su sistema HPLC de preparación .
Aquí hay un ejemplo para ayudarlo a poner las cosas en perspectiva:
| Ejecución analítica | Preparación de ejecución de HPLC | |
|---|---|---|
| ID de columna | 4,6 milímetros | 30 mm |
| Longitudes de columna | 150 mm | 150 mm |
| Tamaño de partícula | 5 micrones | 5 micrones |
| Cargando | 0,1 g | 4,25 g |
| Tasa de flujo | 1 ml / min | 42,5 ml / min |
| Gradiente 10% - 90% | 15 minutos | 15 minutos |
También le sugiero que comience con un cartucho flash de tamaño pequeño o una columna de HPLC de preparación y que aumente a tamaños más grandes en un paso posterior si es necesario.
Si desea adquirir todos los conocimientos esenciales sobre las técnicas de cromatografía preparativa y flash no dude en descargar el documento "Chromapedia - La Guía completa".
Además lo invitamos a que acceda a nuestro próximo Webinar que se brindará en los próximos días "Cromatografía preparativa, una técnica para separar y purificar sustancias". Allí aprenderá los fundamentos de la cromatografía preparativa, conocerá la línea de equipos Büchi para esta técnica, y disfrutará de una video demostración del uso.
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Denoulet Bart
Texto extraído del Blog de Bart de BUCHI. Para mas información acceda al Blog original haciendo clic aquí
